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| 胃黏膜幽门螺杆菌的培养、鉴定和全基因组测序 | 项目编号**** | |
| 2026-11-09 08:17:23 | 公示截止日期2026-11-12 10:00:00 | |
| **** | 付款方式签订合同后支付30%,验收合格后支付70%尾款 | |
| 中标后在我参与的项目中查看 | 联系电话中标后在我参与的项目中查看 | |
| 成交后1工作日 | 到货时间要求||
| ¥ 275,000 | ||
| 符合《政府采购法》第二十二条规定的供应商基本条件 ; 1《医疗机构执业许可证》 :诊疗科目须包含医学检验科,2****实验室技术审核合格证书,3****实验室备案凭证。 (必选) | ||
| 请各位供应商慎重报价,确认完全符合采购人商务、技术要求后再进行报价。成交后,以任何理由不完成交易或不签署合同,或者签署合同后不按照合同履约,均将列入****供应商违规失信行为名单,并根据违规情况禁止该供应商一至三年参与****非政府采购项目。采购项目进行过程中如有技术方面的疑问,请联系网站客服,028****6992,如采购项目需求方面的疑问,联系********采购中心,029-****5401。 | ||
| 胃黏膜幽门螺杆菌的培养、鉴定和全基因组测序 | 500 | 项 |
| ¥ 550 | ||
| 胃粘膜幽门螺杆菌分离培养、菌种鉴定,耐药性分析,表型药敏(MIC法),全基因组测序(WGS),DNA提取、文库构建、测序及毒力因子分析报告。 一、标本采集与接收处理要求 (一)标本采集与转运 (1)标本来源:采用胃镜检查时自胃窦部小弯侧钳取的胃黏膜组织标本,每次至少取2~3块。 (2)标本转运:采集后置于含转运培养基的无菌容器中,2~8℃冷链转运,最优转运时效:标本采集完成后1h内室温(20℃~25℃)送检,为细菌培养阳性率最高的标准时效,延迟转运处置:无法1h****实验室时,标本需置于2℃~8℃冷藏环境保存转运,总时长不得超过24h,严禁冷冻保存,冷冻会直接造成幽门螺杆菌菌体破裂失活内,标本采集与转运技术要求参照WS/T 640—2026执行。 (二)标本接收与登记 (1)接收登记:核对标本信息、采集部位与送检时间,逐份编号登记。 (2)拒收标准:标本干涸、容器破损、超时送检、无转运培养基或标识不清等不合格标本应拒收,并及时通知送检方。 (三)组织研磨处理 (1)将胃黏膜组织置入无菌组织研磨器进行匀浆破碎,充分释放菌体;操作在生物安全柜内进行,避免污染与气溶胶扩散。 二、分离培养技术参数要求 (一)培养条件 (1)微需氧环境:5%O、10%CO、85%N。 (2)培养温度:37℃±0.5℃。 (3)相对湿度:≥90%。 (4)培养时间:初次培养3~5天,未见生长者可**至7天。 (二)培养基要求 (1)基础培养基:血琼脂(含5%~10%羊血)。 (2)选择性培养基:可加入万古霉素、两性霉素B等抗生素添加剂,以抑制杂菌生长、提高分离率。 (三)微需氧培养设备参数 (1)微需氧培养箱:温度37℃±0.5℃,温控精度±0.2℃;气体5%O、10%CO、85%N;相对湿度≥90%;具备超温、气体异常报警及断电保护。 (2)备选方案:小批量标本可使用微需氧产气袋+密封厌氧罐。 (四)生物安全要求 (1)标本处理、接种与鉴定操作均在II级A2生物安全柜内进行。 三、菌种鉴定技术要求 (一)菌落形态与革兰染色镜检 (1)菌落形态:幽门螺杆菌在血琼脂上呈细小、透明、圆形、针尖状菌落。 (2)革兰染色镜检:革兰阴性,呈S形、弧形或螺旋形弯曲杆菌。 (3)显微镜要求:10×目镜、100×油镜。 (二)细菌鉴定试验 (1)采用布鲁克质谱仪(microflex LT/SH)对纯化后的菌落进行鉴定。 (2)质谱图谱应与数据库比对获得匹配分值,达到仪器与数据库设定阈值后方可报告鉴**果。 四、耐药性分析与表型药敏(MIC法)试验要求 (一)检测方法 (1)琼脂稀释法:为CLSI推荐的幽门螺杆菌药敏检测金标准,采用含羊血的Mueller-Hinton琼脂,37℃微需氧孵育至规定时间。 (2)E-test梯度条法:以单一梯度药敏条测定MIC,操作简便,适用于常规检测。 (3)微量肉汤稀释法:亦可作为MIC测定方法。 (二)菌悬液制备与浓度校准 (1)以麦氏比浊仪校准菌悬液浓度至0.5麦氏单位。 (2)麦氏比浊仪:测量范围0.5~6.0麦氏单位,精度±0.1麦氏单位,检测波长625nm,自带校准。 (三)检测药物种类 (1)常用检测药物包括克拉霉素、阿莫**、甲硝唑、四环素、左氧氟沙星等,具体药物组合参考CLSI及实验室既定方案执行。 (四)孵育条件与MIC判读 (1)孵育条件:37℃微需氧环境孵育至规定时间。 (2)MIC判读:以抑制细菌肉眼可见生长的最低药物浓度为MIC,按CLSI折点判读敏感、中介与耐药,如克拉霉素MIC≤0.25mg/L为敏感、≥1.0mg/L为耐药。 (五)质控要求 (1)每批次药敏试验应设质控菌株(如幽门螺杆菌ATCC 43504)平行检测,结果在控方可出具报告。 五、质量控制要求 (一)质控菌株 (1)使用标准菌株或经质谱、分子方法确认的质控菌株,对培养、鉴定与药敏环节进行质量监控。 (二)培养基与试剂质控 (1)培养基与试剂应进行无菌检验与批间验证,确保质量稳定、结果可重复。 (三)环境与生物安全监测 (1)高压蒸汽灭菌器:121℃、103.4kPa,可设置20min灭菌程序,用于培养基与实验耗材灭菌。 (2)紫外消毒装置:用于实验室环境消毒。 六、数据与报告交付要求 (一)检测报告内容 (1)报告应包括标本信息、分离培养结果、菌种鉴**论、药敏MIC值及判读结果、备注等。 (二)原始记录与数据保存 (1)原始记录、图像及检测数据应规范归档保存,菌株于-80℃冷冻保存。 七、设备与平台要求 服务实验室应具备完成上述培养、鉴定与药敏检测的配套设备,核心设备参数如下: (一)核心设备 (1)微需氧培养箱:温度37℃±0.5℃,温控精度±0.2℃;气体5%O、10%CO、85%N;相对湿度≥90%;具备超温、气体异常报警及断电保护。 (2)II级A2生物安全柜:流入气流0.50±0.025m/s,下降气流0.38±0.025m/s;H14级HEPA过滤器,0.3μm颗粒截留效率≥99.995%,气流故障报警。 (3)组织研磨器:用于胃黏膜组织匀浆破碎,释放幽门螺杆菌。 (4)台式微量离心机:最高转速≥12000r/min,适配2mL微量离心管,可选4℃低温功能。 (5)麦氏比浊仪:测量范围0.5~6.0麦氏单位,精度±0.1麦氏单位,检测波长625nm,自带校准。 (6)生物光学显微镜:10×目镜、100×油镜。 (7)高压蒸汽灭菌器:121℃、103.4kPa,可设置20min灭菌程序。 (二)配套辅助设备 (1)移液器:单道0.5μL~1000μL,定期校准。 (2)冰箱:2~8℃冷藏培养基,-20℃冷冻保存药敏条,-80℃保存菌株。 (3)紫外消毒装置:用于实验室环境消毒。 八、细菌基因组扫描图服务技术参数 1、样本(DNA)质检要求: 细菌基因组DNA质检:对提交的细菌基因组DNA样本进行质量检测,包括DNA浓度、纯度及片段完整性指标。OD值无硬性要求,具体以随项目提供的项目质检报告为准。检测方法如下:DNA浓度采用Qubit检测;DNA纯度采用NanoDrop2000检测;DNA完整性采用琼脂糖凝胶电泳检测,应有清晰、完整的主带,无明显降解。合格的DNA样本保存于TE缓冲液中。样本送样量与浓度以实际建库要求为准。 2、测序技术参数要求: (1)使用BGI-DNBSEQ-T7e测序平台进行测序,采用PE150双端测序策略; (2)每个样本原始测序数据量(Raw data)不低于1 G,Q20≥90%、Q30≥80%; (3)原始数据需进行质控:去除接头序列、低质量reads及N含量过高的reads,获得Clean data; (4)Clean data的Q20、Q30、GC含量、错误率等指标需进行统计评估,并提供碱基质量分布、碱基含量分布、错误率分布及GC含量分布等质控图; (5)基于质控后数据进行基因组评估,包括GC-depth分布分析、K-mer(kmer=17)频率分布分析及基因组覆盖度分析,评估基因组大小、杂合与重复情况; (6)基因组组装采用De novo组装策略,组装结果需提供Contig/Scaffold数目、N50、N90、总长度、GC含量、最长片段长度等关键指标。 3、实验要求: (1)使用质检合格的细菌基因组DNA进行文库构建; (2)文库片段主带范围控制在350~550 bp,建库流程包括基因组片段化、末端修复、加A尾、连接测序接头、PCR扩增及片段筛选; (3)每个样本独立建库、独立测序; (4)上机测序前需进行文库质检与定量,保证文库浓度和片段分布满足上机要求; (5)测序获得原始图像数据,经base calling转化为原始测序序列(Raw data)。 4、数据分析内容需包含: 交付成果需基于原始数据完成标准的细菌全基因组生物信息学分析流程,至少包括以下模块: (1)原始数据质控与基因组评估:①原始数据(Raw data)与质控后数据(Clean data)统计表,含样本名、读长、Raw reads/Raw base、Clean reads/Clean base、Q20、Q30、GC含量;②碱基质量分布图(按reads位置、按碱基位置);③碱基含量分布图(A/T/C/G/N随测序位置分布);④碱基错误率分布图;⑤GC含量分布图;⑥GC-depth分布图,用于评估基因组大小、杂合与重复情况;⑦K-mer(kmer=17)频率分布图;⑧基因组覆盖度分析。 (2)基因组组装与组分分析:①De novo基因组组装(输出Contig/Scaffold总长度、数目、N50、N90、最长片段、GC含量);②编码基因预测(Prodigal)及基因长度分布图;③tRNA预测(tRNAscan-SE);④rRNA预测(RNAmmer,含5S/16S/23S rRNA);⑤sRNA预测;⑥重复序列分析(散在重复、串联重复及占基因组比例);⑦可移动元件分析(基因岛、前噬菌体序列、CRISPR-Cas系统、整合子、插入序列)。 (3)基因功能注释:①NR数据库注释(与Nr蛋白库比对,输出基因功能注释表);②Swiss-Prot数据库注释;③Pfam蛋白结构域注释;④COG功能注释(COG主要针对原核生物及部分单细胞真核生物,KOG专门针对真核生物,两者均为NCBI基于直系同源关系构建的蛋白簇数据库,用于功能注释,附COG功能分类统计图);⑤GO功能注释,分生物过程BP、细胞组分CC、分子功能MF三大类,附GO注释统计图;⑥KEGG代谢通路注释,附通路注释统计条形图及通路注释表。 (4)比较基因组与进化分析:通过自动化检索,在数据库中搜索与样本亲缘关系较近的基因组,构建系统进化树,直观展示样本的物种进化地位。对于细菌基因组完成图,基于看家基因和16S rRNA序列与数据库进行比较分析并分别构建进化树;对于细菌基因组扫描图,由于16S rRNA序列往往很难组装完整,故仅基于看家基因构建进化树。若样本量≥3个,还将基于这些样本的相关序列信息构建进化树,以评估样本彼此之间的进化关系。 (5)移动元件与基因组岛分析:①基因组岛预测(IslandPath-DIMOB),输出基因岛位置、长度及岛上基因功能注释;②前噬菌体预测(PHASTER);③CRISPR-Cas系统预测,统计重复序列(DR)、spacer数目及位置;④整合子预测;⑤插入序列(IS)预测;⑥转座子预测。 (6)代谢系统分析:①碳水化合物活性酶(CAZyme)注释,分糖苷水解酶GH、糖基转移酶GT、多糖裂解酶PL、碳水化合物酯酶CE、辅助氧化还原酶AA、碳水化合物结合模块CBM六大类,附分类统计饼图及注释明细表;②次级代谢产物合成基因簇预测(antiSMASH),输出基因簇位置、类型及组成基因。 (7)病原/致病相关分析:①毒力因子注释(VFDB),附毒力因子分类统计;②耐药基因注释(CARD/ResFinder),按耐药药物类别统计;③病原菌宿主互作蛋白注释(PHI),按致病表型(致病力增强/减弱、致死等)统计;④分泌系统分析(Type I~Type VI、Sec-SRP、Tat);⑤分泌蛋白预测;⑥双组分调控系统分析。 (8)基因组可视化:提供CGView及Circos基因组圈图。CGView圈图默认从外到内依次为基因组大小标识、正链基因、负链基因、GC含量、GC-Skew、基因组大小标识,可自定义添加样品物种信息并自动展示基因组大小;Circos圈图默认从外到内依次为基因组大小标识、正链基因、负链基因、ncRNA、GC含量、GC-Skew,可自定义增加ncRNA、基因组岛(GI)、前噬菌体(Prophage)等信息圈,可加在同一圈或不同圈。 5、数据交付需提供完整的实验报告,包括: (1)项目质检报告:所有检测样本的DNA浓度、纯度、完整性相关参数(对应项目质检报告); (2)项目方法学文档:实验操作流程、建库与测序常用软件及版本、技术文档、文库构建说明(对应项目方法学文档); (3)测序数据质控报告(对应项目结题报告):原始数据与质控后数据统计表、碱基质量与含量分布图、错误率分布图、GC分布图; (4)基因组组装报告(对应项目结题报告):基因组大小、Contig/Scaffold统计、N50、GC含量、组装完整性评估结果; (5)基因预测与功能注释报告(对应项目结题报告):编码基因、tRNA/rRNA、sRNA清单及NR/Swiss-Prot/Pfam/COG/GO/KEGG注释结果; (6)专项分析报告(对应项目结题报告):移动元件、CAZyme、次级代谢簇、毒力/耐药/PHI、分泌系统等分析结果及统计图表; (7)基因组圈图及系统发育进化树等可视化结果(对应项目结题报告); (8)项目原始数据:原始测序数据(FASTQ格式)及分析中间结果文件需按要求交付(对应项目原始数据)。 6、设备与平台要求: 服务供应商应具备二代测序仪及配套建库、质控设备;生物信息学分析需使用正版或开源主流分析软件(如SPAdes/ Velvet、Prodigal、BWA、BLAST、HMMER、Prokka、antiSMASH、RAxML/MEGA等),并保证分析流程稳定、结果可重复。 | ||
| 电话支持:7x24小时;服务年限:一年;服务时限:报修后2小时;质保期:6个月;有****医院负责标本运输转运,标本1****实验室率90%以上(提供证****实验室)。对实验结果与数据有疑问时提供技术答疑与分析复核。; | ||
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2026-11-09 08:17:23